SDS-PAGE凝膠制備試劑盒
產(chǎn)品簡介
SDS-PAGE凝膠制備試劑盒規(guī)格：可制40-60塊凝膠
保存: 10% SDS和TEMED (避光) 室溫保存。30%丙烯酰胺混合液、1.5mol/L
Tris(pH8.8)、1.0mol/L Tris(pH6.8)4°C保存、過硫酸銨配制成10%溶液后，分裝成小管-20°C保存，通常半年內(nèi)有效。
本公司生產(chǎn)的SDS-PAGE凝膠配制試劑盒(SDS-PAGE Gel Parparation Kit)提供了配制SDS-PAGE凝膠所需的各種試劑，用戶只需自備制膠器具和蒸餾水，即可配制PAGE膠了。SDS-PAGE凝膠配制試劑盒不僅可用于配制SDS-PAGE凝膠，也可用于配制非變性(native)PAGE凝膠。
本試劑盒可配制不同常規(guī)、不同聚合度的PAGE膠(即聚丙烯酰胺凝膠) 約40-60塊。
包裝清單
| |
|
| 30%丙烯酰胺混合液 |
100ml |
|
1.5mol/L Tris(pH8.8)
|
100ml
|
|
1.0mol/L Tris(pH6.8)
|
30ml |
|
10%過硫酸銨
|
5ml
|
|
10% SDS
|
5ml
|
|
TEMED
|
0.5ml
|
|
說明書
|
一份
|
保存條件
保存: 10% SDS和TEMED (避光) 室溫保存。30%丙烯酰胺混合液、1.5mol/L
Tris(pH8.8)、1.0mol/L Tris(pH6.8)4°C保存、過硫酸銨配制成10%溶液后，分裝成小管-20°C保存，通常半年內(nèi)有效。
使用說明：
1. 10%過硫酸銨為5ml，應(yīng)分裝置-20°C保存，通常半年內(nèi)有效。
2. 根據(jù)目的蛋白的分子量大小選擇合適的凝膠濃度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分離膠(即下層膠)。
SDS-PAGE分離膠的濃度與最佳分離范圍
|
SDS-PAGE分離膠濃度
|
最佳分離范圍
|
|
6%膠
|
57-212kD
|
|
8%膠
|
36-94kD
|
|
10%膠
|
20-80kD
|
|
12%膠
|
12-60kD
|
|
15%膠
|
10-43kD
|
配制6%的PAGE分離膠
|
成分
|
所需各成分的體積(毫升)
|
|
凝膠體積
|
5
|
10
|
15
|
20
|
25
|
30
|
|
蒸餾水
|
2.6
|
5.3
|
7.9
|
10.6
|
13.2
|
15.9
|
|
30%丙烯酰胺混合液
|
1.0
|
2.0
|
3.0
|
4.0
|
5
|
6.0
|
|
1.5mol/L Tris(pH8.8)
|
1.3
|
2.5
|
3.8
|
5.0
|
6.3
|
7.5
|
|
10%SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.25
|
0.3
|
|
10%過硫酸銨
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.25
|
0.3
|
|
TEMED
|
0.004
|
0.008
|
0.012
|
0.016
|
0.02
|
0.024
|
配制8%的PAGE分離膠
|
成分
|
所需各成分的體積(毫升)
|
|
凝膠體積
|
5
|
10
|
15
|
20
|
25
|
30
|
|
蒸餾水
|
2.3
|
4.6
|
6.9
|
9.3
|
11.5
|
13.9
|
|
30%丙烯酰胺混合液
|
1.3
|
2.7
|
4.0
|
5.3
|
6.7
|
8.0
|
|
1.5mol/L Tris(pH8.8)
|
1.3
|
2.5
|
3.8
|
5.0
|
6.3
|
7.5
|
|
10%SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.25
|
0.3
|
|
10%過硫酸銨
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.25
|
0.3
|
|
TEMED
|
0.003
|
0.006
|
0.009
|
0.012
|
0.015
|
0.018
|
配制10%的PAGE分離膠
|
成分
|
所需各成分的體積(毫升)
|
|
凝膠體積
|
5
|
10
|
15
|
20
|
25
|
30
|
|
蒸餾水
|
1.9
|
4.0
|
5.9
|
7.9
|
9.9
|
11.9
|
|
30%丙烯酰胺混合液
|
1.7
|
3.3
|
5.0
|
6.7
|
8.3
|
10.0
|
|
1.5mol/L Tris(pH8.8)
|
1.3
|
2.5
|
3.8
|
5.0
|
6.3
|
7.5
|
|
10%SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.25
|
0.3
|
|
10%過硫酸銨
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.25
|
0.3
|
|
TEMED
|
0.002
|
0.004
|
0.006
|
0.008
|
0.01
|
0.012
|
配制12%的PAGE分離膠
|
成分
|
所需各成分的體積(毫升)
|
|
凝膠體積
|
5
|
10
|
15
|
20
|
25
|
30
|
|
蒸餾水
|
1.6
|
3.3
|
4.9
|
6.6
|
8.2
|
9.9
|
|
30%丙烯酰胺混合液
|
2.0
|
4.0
|
6.0
|
8.0
|
10.0
|
12.0
|
|
1.5mol/L Tris(pH8.8)
|
1.3
|
2.5
|
3.8
|
5.0
|
6.3
|
7.5
|
|
10%SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.25
|
0.3
|
|
10%過硫酸銨
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.25
|
0.3
|
|
TEMED
|
0.002
|
0.004
|
0.006
|
0.008
|
0.01
|
0.012
|
配制15%的PAGE分離膠
|
成分
|
所需各成分的體積(毫升)
|
|
凝膠體積
|
5
|
10
|
15
|
20
|
25
|
30
|
|
蒸餾水
|
1.1
|
2.3
|
3.4
|
4.6
|
5.7
|
6.9
|
|
30%丙烯酰胺混合液
|
2.5
|
5.0
|
7.5
|
10.0
|
12.5
|
15.0
|
|
1.5mol/L Tris(pH8.8)
|
1.3
|
2.5
|
3.8
|
5.0
|
6.3
|
7.5
|
|
10%SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.25
|
0.3
|
|
10%過硫酸銨
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
0.25
|
0.3
|
|
TEMED
|
0.002
|
0.004
|
0.006
|
0.008
|
0.001
|
0.012
|
3. 按照如下表格配制SDS-PAGE的濃縮膠(也稱上層膠、積層膠或堆積膠)
配制不同體積的濃縮膠
|
成分
|
所需各成分的體積(毫升)
|
|
凝膠體積
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
8
|
|
蒸餾水
|
1.4
|
2.1
|
2.7
|
3.4
|
4.1
|
5.5
|
|
30%丙烯酰胺混合液
|
0.33
|
0.5
|
0.67
|
0.83
|
1.0
|
1.3
|
|
1.0mol/L Tris(pH6.8)
|
0.25
|
0.38
|
0.5
|
0.63
|
0.75
|
1.0
|
|
10%SDS
|
0.02
|
0.03
|
0.04
|
0.05
|
0.06
|
0.08
|
|
10%過硫酸銨
|
0.02
|
0.03
|
0.04
|
0.05
|
0.06
|
0.08
|
|
TEMED
|
0.002
|
0.003
|
0.004
|
0.005
|
0.006
|
0.008
|
注意事項(xiàng)
10%過硫酸銨的水溶液不穩(wěn)定,每次取用后應(yīng)立即放回冰箱，盡量減少室溫存放時間，以防失效。如發(fā)現(xiàn)凝膠聚合不好，應(yīng)考慮丟棄使用過的10%過硫酸銨，更換新配制的10%過硫酸銨。
另外PAGE凝聚的速度和溫度及催化劑的用量關(guān)系密切，在其它條件不變的情況下，可通過改變TEMED的用量，控制PAGE凝膠的聚合速度，凝膠聚合過快不利于操作。操作中，特別是液體的混勻應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生。
未聚合的丙烯酰胺有毒，為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
